| 摘 要： | 研究组织蛋白酶D(cathepsin D,Cat D)在骨肉瘤细胞中的表达,并通过shRNA技术沉默Cat D,探讨该分子对骨肉瘤细胞MG63和U2OS增殖、凋亡及侵袭的作用和机制。构建sh-Cat D质粒及阴性对照质粒sh-NC并转染至骨肉瘤细胞MG63和U2OS中,RT-PCR和Western blotting检测Cat D在骨肉瘤细胞中的表达;CCK-8法、克隆形成实验和EdU荧光染色实验检测骨肉瘤细胞的增殖活性;Transwell实验检测肿瘤细胞的侵袭能力;FACS检测肿瘤细胞的凋亡情况;Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达及Akt/mTOR信号通路相关蛋白(Akt和mTOR)的磷酸化水平。结果显示,相较健康人成骨细胞hFOB,Cat D在骨肉瘤细胞中的表达显著升高,尤其是MG63和U2OS细胞中Cat D的高表达均显著(均P<0.001)。与sh-NC组相比,Cat D沉默显著抑制MG63和U2OS细胞的增殖和侵袭(均P<0.001)。与sh-NC组相比,Cat D沉默通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达促进肿瘤细胞的...
|
