SARS冠状病毒M基因膜内区的克隆、表达与鉴定

目的对SAILS冠状病毒M蛋白膜内部分（Mc蛋白）的基因（Mc区）进行克隆、表达及鉴定。方法采用PCR技术从SAILS-CoV GD322株M基因全长片段上扩增得到Mc区，克隆至pGEM-T载体。利用引物上的EcoR I／Xho I酶切位点切下Mc区插入至pET-32a（＋）表达载体，转化原核表达系统BL21，表达His-融合蛋白，利用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定。结果扩增的Mc区长度为360bp，重组子经PCR，双酶切和测序鉴定，获得pET-32a（＋）／Mc原核表达菌株并可进行高效表达，表达产物经SDS-PAGE和Western-blot验证为相对分子质量约43000的融合蛋白，与预期理论值相符。结论实现了Mc蛋白的高效表达，为进一步研究SAILS冠状病毒Mc蛋白的生物学作用奠定了基础。