| 狗凝血Ⅸ因子cDNA的克隆及其离体表达研究 |
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| 引用本文： | 高啸波,卢大儒,邱信芳,薛京伦.狗凝血Ⅸ因子cDNA的克隆及其离体表达研究[J].中国科学C辑,1999,29(4):435. |
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| 作者姓名： | 高啸波 卢大儒 邱信芳 薛京伦 |
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| 作者单位： | 复旦大学遗传学研究所,上海,200433 |
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| 摘 要： | 根据cFⅨcDNA(canineFⅨ ,cFⅨ )顺序设计引物 ,采用RT PCR技术 ,从狗肝细胞中提取mRNA ,逆转录成cFⅨcDNA ,克隆到pGEM T质粒载体上 ,经DNA顺序分析 ,挑选克隆 ,拼接并测序鉴定 ,得到DNA顺序完全正确且含有cFⅨ完整编码区的cDNA ,进一步构建成以G1Na为框架的反转录病毒载体G1NaCcⅨ (hCMV启动子控制cFⅨ转录 )和G1NaMBcⅨ (MCK增强子和β actin启动子共同控制cFⅨ转录 ) ,并用于反转录病毒介导的基因转移 .狗原代皮肤成纤维细胞实验结果显示 ,cFⅨ能够在狗皮肤成纤维细胞中表达 ,表达水平分别为G1NaCcⅨ :173ng/ 10 6 细胞·2 4h ;G1NaMBcⅨ :2 11ng/ 10 6 细胞·2 4h .此结果为血友病B狗基因治疗动物试验的开展奠定了基础 .
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| 关 键 词： | 狗皮肤成纤维细胞 反转录病毒载体 狗凝血因子Ⅸ 基因转移 基因治疗 |
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