基于TaqMan-MGB探针荧光定量PCR技术检定细菌和人基因组拷贝数比值方法的建立

目的建立一种可以检测细菌和人基因组拷贝数比值的方法。方法分别设计细菌和人基因组特异性引物及通用探针。以大肠埃希菌和幽门螺杆菌混合菌液及人全血样本模拟混合样本。采用TaqMan-MGB荧光PCR方法对不同稀释浓度的混合样本进行定量分析。通过比较实测比值(Ct值换算成拷贝数的比值)与理论比值,评估本研究方法的可行性和准确性。结果经变异系数法(CV)分析,6个不同浓度样本(DB1、DB2、DB3、DH1、DH2和DH3)的CV值依次为4.48%、1.57%、4.67%、1.55%、0.49%和1.29%。9组模拟混合样本中,实测比值(DB/DH拷贝数)和理论比值的误差均小于0.1,且两组数值相关性极显著(r=1.000,P0.001)。结论本研究建立的基于TaqManMGB探针荧光定量PCR技术检定细菌和人基因组拷贝数比值的方法重复性和准确度良好,可用于细菌和人类组织样本基因组拷贝数比例的检定。