大鼠不同纯度胰岛样本中干细胞标志物细胞角蛋白19的表达

背景:胰腺中存在的干细胞在合适的培养条件下可分化为具有内分泌功能的细胞,可以作为一种新的胰岛来源治疗糖尿病。目的:分析大鼠胰岛纯化程度与其中所携带的干细胞数量的关系。设计:以细胞为观察对象,对比实验。单位:绵阳市第三人民医院材料:实验于2005-03/2006-03在重庆医科大学附属一院中心实验室完成。选取30只清洁级健康雄性SD大鼠,鼠龄50 d。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。细胞角蛋白19和β-actin引物由上海英俊生物有限公司设计。Brdu试剂、小鼠抗大鼠Brdu单克隆抗体、兔抗鼠CK-19多克隆抗体、Brdu免疫组织化学试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。Histostain~(TM)-DS免疫组织化学双染试剂盒购于北京中杉公司。方法:大鼠腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记,均采用胶原酶V型通过胰管对胰腺进行灌注,切取胰腺,剪碎,吹打、消化、离心获得胰岛细胞沉淀物。离心后沉淀物进行如下处理:即,不纯化组:胰岛沉淀物不进行纯化;高密度介质纯化法组:胰岛沉淀物中加入体积分数为25%的Ficoll液纯化;两种不同密度梯度纯化法组:胰岛沉淀物依次加入25%及11%的Ficoll液纯化。主要观察指标:应用免疫组织化学法检测胰岛样本中Brdu及细胞角蛋白19阳性细胞的表达,应用反转录聚合酶链反应检测不同纯度胰岛中细胞角蛋白19 mRNA的表达。结果:①胰岛纯度:不纯化组最低,3组获得的胰岛细胞纯度比较,差异有显著性意义(F=89.42,P<0.05)。②胰岛样本中Brdu和细胞角蛋白19阳性细胞的表达:不纯化组的阳性表达高于高密度介质纯化法组和两种不同密度梯度纯化法组,差异有显著性意义(F=18.64,22.12,38.61,P<0.01)。③胰岛中细胞角蛋白19 mRNA的表达:不纯化组最强,两种不同密度梯度纯化法组最弱。结论:不同纯度的胰岛中有Brdu及细胞角蛋白19阳性细胞,在低纯度胰岛中含有较多的干细胞。

Expression of cytokeratin-19 as a stem cell marker in different-purity islet samples of rats