小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立

本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原，在确定抗原包被量和血清稀释度，优化血清和酶标二抗反应时间的基础上，用ROC曲线分析确定检测临界值，建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法，然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价。结果显示，建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10^-6μg/孔，待检血清最佳稀释度为1∶100；血清及酶标二抗孵育时间均为10 min，检测方法的临界值为S/P=9.77%，批内及批间变异系数均小于10%；与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应；用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测247份田间血清，两者相对符合率为94.33%，但化学发光法敏感性更高。研究结果表明，建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定，可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测。