纤维微菌β-1,3-葡聚糖酶的克隆表达及对灵芝细胞壁的水解作用 |
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引用本文: | 杨梦莲,单逸蓝,沈微,朱新文,杨海泉,陈献忠,陈磊,夏媛媛.纤维微菌β-1,3-葡聚糖酶的克隆表达及对灵芝细胞壁的水解作用[J].食品与发酵工业,2023(1):10-18. |
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作者姓名: | 杨梦莲 单逸蓝 沈微 朱新文 杨海泉 陈献忠 陈磊 夏媛媛 |
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作者单位: | 1. 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室;2. 山东省东阿县农业农村局 |
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摘 要: | 该文旨在研究一种酶解灵芝(Ganoderma lucidum)菌丝体从而提高其胞内蛋白提取效率的方法。通过PCR方法扩增获得纤维微菌(Cellulosimicrobium sp.)CICIM6906的β-1,3-葡聚糖酶编码基因,该基因命名为bgl6906并与表达载体连接,构建重组质粒pET28a-bgl6906,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-bgl6906。重组菌在TB培养基中进行诱导表达,表达产物在自身信号肽引导下大部分分泌到细胞外。以茯苓多糖为底物时,重组酶BGL6906纯酶比酶活力为567.8 U/mg,最适pH为5.5,最适温度为50℃。重组菌在15 L发酵罐中发酵72 h胞外酶活力达到67 U/mL。重组酶BGL6906与果胶酶交替水解灵芝菌丝体培养物,可以有效水解细胞壁,获得部分原生质体。进一步辅助短时超声波破碎可以大幅度提高灵芝胞内产物的释放。
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关 键 词: | 纤维微菌 β-1 3-葡聚糖酶 分泌表达 灵芝 细胞破碎 |
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