Anaplasmosis in Uganda. I. Use of dried blood on filter papers and serum samples for serodiagnosis of anaplasmosis—A comparative study

Summary The suitability of blood collected on filter papers in comparison with corresponding conventional serum samples in the diagnosis of bovine anaplasmosis was studied using the complement fixation test, DOT-ELISA, Western immunoblot and rapid card agglutination test. Dried blood on Whatman filter paper no. 1 was eluted in PBS 0·05% Tween 20 giving an initial dilution of 1∶10. The reactivity of the eluted samples in both DOT-ELISA and Western immunoblotting were similar to those obtained with the corresponding straight serum sample dilutions. Filter paper samples gave lower reactivity in the remaining tests when compared with corresponding serum samples. There was no significant difference in the reactivity between the eluates from filter papers stored at temperatures ranging between 15·5 and 24°C and those kept refrigerated. Storage at 15·5 to 24°C did not significantly affect reactivity for up to six months. Eluates from filter papers stored for six months at 15·5 to 24°C continued to give similar reactivity as those from freshly prepared filter papers in both DOT-ELISA and Western blot, and in the rapid card agglutination test. It is concluded that collecting blood on filter papers is a suitable technique for large scale seroepidemiological studies on anaplasmosis and offers many advantages in developing countries where transport and cold chain facilities are a major constraint.

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Resumen Se estudió la efectividad de muestras de sangre colectadas en papel filtro, en comparación con las correspondientes muestras convencionales du suero, en el diagnóstico de anaplasmosis bovina, utilizando fijación de complemento, DOT-ELISA, Western, immunoblot y la prueba rápida de la tarjeta. La sangre seca en papel Whatman N^o 1 fue removida con PBS 0·05% entre 20, dando una dilución inicial de 1∶10. La reactividad de las muestras removidas de papel filtro, en la prueba de DOT-ELISA y Western immunoblotting, fueron similares a la obtenida con la correspondiente muestra de suero. Las muestras de papel filtro reaccionaron menos en las otras pruebas, cuando se compararon con las correspondients muestras du suero. No hubo diferencia significativa en la reactividad entre los lavados del papel filtro guardados a temperaturas entre 15·5 y 24°C y aquellos guardados en refrigeración. El almacenaje entre 15·5 y 24°C, no afectó la reactividad hastas seis meses. Los lavados de papel filtro guardados por seis meses entre 15·5 y 24°C, dieron la misma reactividad como los lavados frescos, en la prueba DOT-ELISA y Western blot, lo mismo que en la prueba de aglutinación rápida de tarjeta. Se concluye, qu la colección de sangre en papel filtro, es una buena técnica para estudios epidemiológicos de cierta magnitud, sobre anaplasmosis, ofreciendo ventajas considerables en paises en desarrollo en donde las cadenas de frío son deficientes.

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Résumé La fiabilité du sang récolté sur papier filtre comparée à celle des prélèvements conventionnels de sérum pour le diagnostic de l'anaplasmose a été étudiée à l'aide des tests suivants: fixation du complément, ELISA, immunoblot de Western, test rapide d'agglutination sur carte. Du sang séché sur papier filtre Whatman N^o 1 a fait l'object d'une élution dans une solution de PBS à 0,05 p. 100 (Tween 20) pour donner une dilution de base au dilution de base au 1∶10. Le réactivité des échantillons, autant avec le test ELISA que l'immunoblot Western, a été identique à celle obtenue par dilution directe de sérums homologue. Les échantillons sur papier filtre ont donné une réactivité plus faible pour les autres tests, comparée à celle des échantillons de sérum semblables. Aucune différence significative n'a été décelée quant à leur réactivité les éluats provenant de papiers filtres stockés à des températures comprises entre 15,5 et 24°C at ceux conservés au réfrigérateur. Le stockage entre 15,5 et 24°C n'a pas non plus affecté la réactivité de fa?on significative; les éluats conservés à partir des papiers filtres, à cette même température durant 6 mois, ont montré des réactions identiques que ceux provenant de papiers filtres fra?chement préparés, à la fois avec le test ELISA, celui de Western Blot et le test d'agglutination rapide sur carte. On peut conclure que la collecte du sang sur papier filtre est une technique adaptée à l'étude épidémiologique de l'anaplasmose à grande échelle. Elle offre de nombreux avantages dans les pays en développement où offre de nombreux avantages dans les pays en développement où les moyens de transports et la cha?ne du froid constituent des contraintes majeures.