弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV工程菌的构建

为提高弗氏链霉菌对泰乐菌素的产素能力，构建了弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV基因工程菌。本研究以弗氏链霉菌作为出发菌株，并以其全基因组DNA为模板分别扩增tylF和tylE以及tylCV基因、以质粒pSET152为模板扩增强启动子基因permE，采用重叠延伸PCR技术和EcoRV、XbaI双酶切结合的连接方法，构建弗氏链霉菌表达载体pSET152-permE-tylF-tylE-tylCV，并转化至大肠杆菌ET12567，利用大肠-链霉菌属间接合转移技术获得工程菌株。研究结果表明，工程菌株摇瓶效价(14580 u/mL)比出发菌株(11318 u/mL)提高了29%；液相色谱结果显示，工程菌株的泰乐菌素A和泰乐菌素C相对峰面积显著(P≤0.05)高于出发菌株。增加弗氏链霉菌tylF、tylE和tylCV的拷贝数可有效提高泰乐菌素的产量，以及优化组分，为泰乐菌素生产菌的遗传改造提供参考。