|
|||||
|
|
| 牛卵丘细胞的生长特征与转基因 | |
| 引用本文： | 吕自力,王亮,石国庆.牛卵丘细胞的生长特征与转基因[J].中国实验动物学报,2011,19(4):306-311,I0017. |
| 作者姓名： | 吕自力 王亮 石国庆 |
| 作者单位： | 1. 石河子大学动物科技学院,石河子 832000;乌鲁木齐市妇幼保健院,乌鲁木齐 830001 2. 中国科学院新疆理化技术研究所,乌鲁木齐,830011 3. 新疆农垦科学院畜牧兽医所,石河子 832000;石河子大学动物科技学院,石河子 832000 |
| 基金项目： | 科技部自然基金(30860193); 农业部(nycytx-40-06) |
| 摘 要： | 目的了解牛卵丘细胞的生长特征及构建的基因载体对卵丘细胞的转染情况和转染后阳性细胞的扩增效率。方法用透明质酸酶消化牛卵丘/卵母细胞复合体(COCs)获得牛卵丘细胞,了解牛卵丘细胞的生长特点,并用分子大小分别为7178 bp和31 085 bp两种带有增强绿色荧光蛋白(EGFP)和新霉素抗性基因(Neor)的质粒载体pMSCV-EGFP-Neor和pGC1-collagen-EGFP-Neor分别转染靶细胞。结果用脂质体法转染对数生长期的细胞,均获得了绿色荧光阳性细胞,但小质粒的转染效率在72 h时是大质粒的6倍(14%vs.2.3%)。在800μg/mLG418筛选浓度下,14 d后分别获得了7个和3个较明显的单克隆细胞群,对它们进行挑选、扩大,都获得了较纯的单克隆细胞系。最后根据EGFP和collagen的已知基因序列对转染pGC1-collagen-EGFP-Neor质粒的阳性细胞进行三个不同区域DNA片段的扩增,结果表明,扩增的基因片段大小正确,数目完整。结论对卵丘细胞进行基因转染,分子大小等于或小于31 kb的基因可以有效转入,但小分子载体比大分子载体具有更高的转染效率。经过筛选都可以获得纯的转基因细胞... |
| 关 键 词： | 牛 卵丘细胞 细胞培养 脂质体 细胞转染 转基因 |
Growth characteristics and transgenosis of bovine cumulus cells |
|
| LU Zi-li,WANG Liang,SHI Guo-qing.Growth characteristics and transgenosis of bovine cumulus cells[J].Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica,2011,19(4):306-311,I0017. | |
| Authors: | LU Zi-li WANG Liang SHI Guo-qing |
| Affiliation: | LU Zi-li1,2,WANG Liang3,SHI Guo-qing4,1(1.College of Animal Science & Technology,Shihezi University,Shihezi 832000,China,2.Urumqi Maternal and Child Health Care Hospital,Urumqi 830001,3.Xinjiang Institute of Physics and Chemistry,Chinese Academy of Science,Urumqi 830011,4.Institute of Animal Husbandry and Veterinary,Xinjiang Agricultural Reclamation Academy,Shihezi 832000) |
| Abstract: | Objective To understand the growth characteristics of bovine cumulus cells and the transfection efficiency of cumulus cells,based on the gene vector pGC1-collagen-EGFP-Neor that containing human collagen type I cDNA gene and mammary gland specific promoter,constructed in our laboratory.Methods Bovine cumulus cells were obtained by digestion of bovine cumulus/oocyte complexes(COCs) using hyaluronidase.Gene vector pMSCV-EGFP-Neor and pGC1-collagen-EGFP-Neor was transfected into cumulus cells with cationic lip... |
| Keywords: | Bovine cumulus cells Cell culture Liposomes Cell transfection Transgene |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ | |
