| 利用重组PCR技术构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体 |
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| 引用本文： | 张运峰,范永山,冯志娟,林满丽,董金皋. 利用重组PCR技术构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体[J]. 安徽农业科学, 2009, 37(27): 12972-12974 |
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| 作者姓名： | 张运峰 范永山 冯志娟 林满丽 董金皋 |
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| 作者单位： | 河北农业大学真菌毒素实验室,河北保定,071000;唐山师范学院生命科学系,河北唐山,063000;唐山师范学院生命科学系,河北唐山,063000;河北农业大学真菌毒素实验室,河北保定,071000 |
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| 基金项目： | 河北省科技厅项目，唐山师范学院博士资金项目 |
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| 摘 要： | [目的]构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体。[方法]利用含有GFP基因和Nos终止子的A2GFP质粒和舍有普遍适于真菌基因表达的构巢曲霉启动子（Ptrpc）的pUCATPH质粒，通过重组PcR技术构建Ptrpc-GFP一Nos重组基因，然后插入到农杆菌质粒pCAMBIA1300的多克隆位点，构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体，并对其进行酶切和测序鉴定。[结果]通过重组PcR技术，仅通过Ptrpc启动子基因扩增、GFP—Nos基因扩增、Ptrpc—GFP一Nos重组基因扩增、1次双酶切、1次连接和转化，就成功地构建了适合真菌ATMT转化的GFP基因的表达载体pCAMBIA1300-PGN，不需要构建中间载体，并大大简化了连接步骤。该载体经过PCR、酶切和测序鉴定，结构正确。连接准确，序列无误。[结论]该研究为真菌ATMT突变体的构建和快速检测奠定了基础。
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| 关 键 词： | 重组PCR技术 绿色荧光蛋白 ATMT转化 表达载体 |
Construction of GFP Gene Expression Vector Suitable for Fungal ATMT Transduction by Recombinant PCR Technology |
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| ZHANG Yun-feng et al. Construction of GFP Gene Expression Vector Suitable for Fungal ATMT Transduction by Recombinant PCR Technology[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2009, 37(27): 12972-12974 |
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| Authors: | ZHANG Yun-feng et al |
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| Affiliation: | ZHANG Yun-feng et al(Laboratory for Epiphyte , Toxin,Hebei Agricultural University,Baoding,Hebei 071000) |
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| Abstract: | [Objective] The aim was to construct the GFP gene expression vector suitable for fungal ATMT transduction.[Method] The A2GFP plasmid contained GFP gene and Nos terminator and pUCATPH plasmid contained Aspergillus nidulans promoter Ptrpc generally suitable for epiphyte gene expression were used for construction of Ptrpc-GFP-Nos recombinant gene by recombinant PCR technology,then the recombinant was inserted into multiple cloning site of agrobacterium plasmid pCAMBIA 1300,and then the GFP gene expression vect... |
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| Keywords: | Recombinant PCR technology Green fluorescent protein ATMT transduction Expression vector |
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