人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 吴春风,马忠森,王秀丽,杨俊玲,杨洋,张越,图们乌力吉,乔俊华.人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2007,23(12):1160-1162. |
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作者姓名: | 吴春风 马忠森 王秀丽 杨俊玲 杨洋 张越 图们乌力吉 乔俊华 |
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作者单位: | 1. 吉林大学第二临床医院呼吸内科,吉林,长春,130041;吉林省人民医院呼吸疗区,吉林,长春,130021 2. 吉林大学第二临床医院呼吸内科,吉林,长春,130041 3. 吉林大学第二临床医院血液内科,吉林,长春,130041 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;吉林省科技发展计划 |
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摘 要: | 目的:制备DcR3融合蛋白及其多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:将亚克隆构建的pET28a( )/DcR3重组表达质粒转化入大肠杆菌(E.coli)BL21菌株,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析蛋白产物,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果:pET28a( )/DcR3重组表达质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为33000的目的蛋白,表达量约占菌体蛋白总量的38%,纯化后的目的蛋白纯度达98%。Western blot显示纯化蛋白与抗DcR3单克隆抗体(mAb)具有良好的反应性。纯化后多克隆抗体效价达1.28×10-6。结论:DcR3蛋白在E.coli中得到高效表达,成功制备高纯度DcR3蛋白及高效价抗DcR3多克隆抗体,为研究DcR3在组织中的表达、分布,研制ELISA试剂盒以检测恶性肿瘤及自身免疫性疾病等患者血清DcR3表达水平提供实验基础。
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关 键 词: | 原核表达 蛋白质纯化 多克隆抗体 |
文章编号: | 1007-8738(2007)12-1160-03 |
收稿时间: | 2007-07-16 |
修稿时间: | 2007-10-16 |
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