猪IL-2、IL-12p40和IFN-γ SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立

针对猪Th1型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物，构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品，建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green I real-time PCR方法。该方法线性关系好，标准曲线的相关系数均达到0.997以上；敏感性高，初始模板的检出下限均达到100拷贝/μL；特异性强，扩增产物形成单一的特异性熔解峰；重复性好，组内与组间的变异系数均小于3.5%。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA的表达水平进行了检测。结果表明，所建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。