| 摘 要： | 目的 探讨重楼皂苷（RPS）在 miR-125a-5p 靶向调控 Grb2 相关结合蛋白 2（GAB2）诱导乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用及机制。 方法 取人乳腺癌细胞系 MCF-7 和人正常乳腺上皮细胞系 MCF-10A，采用 qRT-PCR、Western blot 法分别检测并比较两者 miR-125a-5p、GAB2 表达水平。再将 MCF-7 细胞按随机数字表法分成 6 组：RPS 0 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL组、RPS 80 μg/mL+阴性抗体组、RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组、RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p+阴性干扰组和RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组，每组设 3 个复孔；培养 48 h 后检测并比较 miR-125a-5p、GAB2、B 淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）表达水平以及细胞增殖率、细胞凋亡率。将 GAB2 与空白质粒和过表达 miR-125a-5p 质粒共转染到 MCF-7 细胞中，采用荧光素酶 Promega 检测法检测 miR-125a-5p 与 GAB2 的靶向作用。 结果 与 MCF-10A 细胞比较，MCF-7 细胞中 miR-125a-5p 表达水平较低（P＜0.05），GAB2 表达水平较高（P＜0.05）。与 RPS 0 μg/mL 组比较，RPS80 μg/mL 组和 RPS 80 μg/mL+阴性抗体组 miR-125a-5p、Bax 表达水平和细胞凋亡率均明显升高（均 P＜0.05），细胞增殖率和Bcl-2 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）；RPS 80 μg/mL 组和 RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干扰组 GAB2 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）。与 RPS 80 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL+阴性抗体组比较，RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组 miR-125a-5p 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）；RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组和 RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干扰组细胞增殖率和 Bcl-2 表达水平均明显升高（均 P＜0.05），细胞凋亡率和 Bax 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）。与RPS 80 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干扰组比较，RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组GAB2表达水平均明显降低（均P＜0.05）。与RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p组、RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干扰组比较，RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组细胞增殖率和 Bcl-2 表达水平均明显降低（均 P＜0.05），细胞凋亡率和 Bax 表达水平均明显升高（均 P＜0.05）。GAB2 与 miR-125a-5p 的结合位点为 CAGGGA，GAB2 的突变位点为 AGUCCC；miR-125a-5p与GAB2野生型结合能明显降低荧光活性比（P＜0.05），但与GAB2突变型结合不影响荧光活性比（P＞0.05）。 结论 RPS 能够介导 miR-125a-5p/ GAB2 轴发挥抗肿瘤活性，具体机制可能与 miR-125a-5p 发挥抑癌效应来负向调控 GAB2 蛋白表达，进而影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡能力有关。
|
