| STAT1特异性siRNA真核表达载体的构建及体外转染优化 |
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| 引用本文： | 贾晓琴,熊瑛,王宋平,李平.STAT1特异性siRNA真核表达载体的构建及体外转染优化[J].泸州医学院学报,2009,32(2). |
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| 作者姓名： | 贾晓琴 熊瑛 王宋平 李平 |
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| 作者单位： | 1. 泸州医学院附属医院呼吸内科,四川泸州,646000
2. 泸州医学院附属医院炎症与变态反应实验室,四川泸州,646000 |
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| 基金项目： | 四川省卫生厅科研课题 |
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| 摘 要： | 目的:构建STAT1特异性siRNA真核表达载体,并转染人气道上皮细胞(16HBE).方法:根据GeneBank数据库提供的STAT1基因两种变异体的共同核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链siRNA,再转化为能表达其小发卡结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)的DNA序列,并将其连接到带有卡那霉素抗性和增强绿包荧光蛋白的pGenesil-1.1真核表达载体上,将其转染至气道上皮(16HBE)细胞中,观察荧光表达,鉴定其转染效率.结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功地构建了二条表达小干扰RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到(16HBE)细胞株中,质粒/脂质体为1μg:2μl条件,能有效地转染细胞,转染效率达到50%以上.结论:成功构建siRNA真核表达载体并能成功体外转染,为下一步气道炎症性疾病的基因沉默研究奠定了良好的基础.
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| 关 键 词： | STAT1基因 小干扰KNA 小发卡结构RNA 转染 KNA干扰 |
CONSTRUCTION OF EUKARYOTIC EXPRESSION VECTOR OF SIRNA SPECIFIC FOR STAT1 GENE AND OPTIMIZATION OF ITS TRANSFECTION EFFICIENCY IN VITRO |
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