干涉RNA抑制人骨肉瘤细胞PCNA表达的实验研究

目的：构建增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PC-NA)短发夹状RNA表达载体，检测其对骨肉瘤细胞PCNA mRNA及蛋白表达的影响。方法：体外构建PCNA shRNA表达载体pSilence2．1-neo-PCNA，转染骨肉瘤细胞系MG-63，RT-PCR和免疫组化方法检测转染后PCNA mRNA及蛋白的表达，MTT比色法和集落形成实验检测细胞增殖活性。结果：pSilence2．1-neo-PCNA载体转染能显著抑制PCNA mRNA和蛋白的表达，转染后24.48和72h mRNA表达抑制率分别为68．62％、80．62％和73．11％，PI值分别为空白组的47．72％、23．37％和35．90％。转染后48h细胞增殖的抑制率为68．89％。结论：pSilence2．1-neo-PCNA可显著抑制MG-63细胞PCNA mRNA和蛋白的表达及细胞的增殖活性。