| 小鼠白细胞介素12双顺反子真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 |
| |
| 引用本文： | 唐展云,赖冠华,陈诗书. 小鼠白细胞介素12双顺反子真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 1999, 15(1): 48-53 |
| |
| 作者姓名： | 唐展云 赖冠华 陈诗书 |
| |
| 作者单位： | 上海第二医科大学人类基因治疗研究中心 |
| |
| 基金项目： | 国家“863”计划基金,国家自然科学基金 |
| |
| 摘 要： | 克隆小鼠白细胞介素１２（ＩＬ－１２）ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ，并构建同时含ｍＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５ｃＤＮＡ的双顺反子真核表达载体及其在哺乳动物细胞中的表达．白细胞介素１２是由巨噬细胞，树突状细胞等抗原提呈细胞产生的一种异二聚体细胞因子，对机体的细胞免疫功能起着重要的调节作用．利用脂多糖（１００ｐｇ／ｍｌ）和小鼠重组干扰素（ＩＦＮ－γ５００Ｕ／ｍｌ）体外联合刺激小鼠腹腔巨噬细胞，从中提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出含信号肽的小鼠白细胞介素１２（ｍＩＬ－１２）ｐ４０及ｐ３５全长ｃＤ－ＮＡ．ＰＣＲ产物经酶切后，分别克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ载体中，序列测定结果与文献报道序列一致．然后利用脊髓灰质炎（Ｐｏｌｉｏ）病毒内核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）连接ｍＩＬ－１２ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ，亚克隆至ｐｃＤＮＡ３载体中，构建成含ｍＩＬ－１２ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ双顺反子真核表达载体，即ｐｃＤＮＡ３／ｍＩＬ－１２，ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ同时受ｐｃＤＮＡ３中ｈＣＭＶ启动子驱动，将ｐ４０及ｐ３５转录至同一ｍＲ－ＮＡ上．通过ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ将ｐｃＤＮＡ３／ｍＩＬ－１２转染ＣＯＳ－７细胞，７２ｈ收集培养上清，测定ｍ
|
| 关 键 词： | 小鼠白细胞介素12 内核糖体进入位点 pcDNA3 |
| 收稿时间： | 1999-02-20 |
Construction of Bicistronic Eukaryotic Expression Vector Containing Murine Interleukin 12 and its Expression in COS 7 Cells |
| |
| TANG Zhanyun,LAI Guanhua,CHEN Shishu. Construction of Bicistronic Eukaryotic Expression Vector Containing Murine Interleukin 12 and its Expression in COS 7 Cells[J]. Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology, 1999, 15(1): 48-53 |
| |
| Authors: | TANG Zhanyun LAI Guanhua CHEN Shishu |
| |
| Affiliation: | (Research Center of Human Gene Therapy,Shanghai Second Medical University,Shanghai 200025 |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Murine interleukin 12 IRES pcDNA3 |
|
| 点击此处可从《中国生物化学与分子生物学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国生物化学与分子生物学报》下载全文 |
