鸡γ干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗病毒活性

【目的】克隆鸡γ-干扰素（chIFN-γ）基因，大肠杆菌表达及产物纯化与活性检测。【方法】通过RT-PCR方法用ConA刺激的20日龄SPF鸡的脾脏淋巴细胞中扩增出chIFN-γ成熟蛋白基因cDNA，克隆至原核表达载体pET-32a (+)，构建重组表达质粒pET-32a (+)-chIFN-γ，在大肠杆菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达，利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白，并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。利用MDCK-VSV系统测定抗病毒活性。【结果】克隆得到456 bp 的chIFN-γ成熟蛋白编码基因，大肠杆菌中成功表达chIFN-γ蛋白，分子量约为31.0 kDa，能与抗His的单克隆抗体和兔源多抗血清发生特异性反应。表达蛋白一部分形成包涵体，另一部分以可溶形式存在，可溶性蛋白经镍柱在天然条件下的纯化得率为3.0 mg/mL。生物学活性试验表明，1:32 稀释纯化的重组chIFN-γ （rchIFN-γ）孵育MDCK细胞后能抵抗100TCID50的VSV攻击。【结论】通过镍柱天然纯化获得的rchIFN-γ具有较好的抗病毒活性，为研制新型抗病毒干扰素制剂奠定基础。