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RT-PCR方法检测单核细胞增生李斯特活菌研究
引用本文:李善志,吴清平,张菊梅,郭伟鹏.RT-PCR方法检测单核细胞增生李斯特活菌研究[J].中国卫生检验杂志,2006,16(6):641-643.
作者姓名:李善志  吴清平  张菊梅  郭伟鹏
作者单位:1. 广东省微生物研究所,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广州,510070;中国科学院研究生院,北京,100049
2. 广东省微生物研究所,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广州,510070
摘    要:目的:建立单核细胞增生李斯特活菌快速检测技术,解决PCR带来的假阳性问题。方法:采用以mRNA为基础的RT-PCR方法对单核细胞增生李斯特氏菌的hlyA基因进行检测,设计引物,扩增,并作了特异性和灵敏度比较。结果:该引物能较好地扩增单核细胞增生李斯特菌的特异性片断,而对其它的李斯特菌以及常见食源性致病菌无特异性扩增条带;检测的灵敏度纯菌可达到1×104cfu/m l,人工污染样品猪肉、虾肉和牛奶等培养12~16 h,可达4.5 cfu/m l(g)。结论:可以应用该方法对样品中单核细胞增生李斯特活菌进行检测,能较好地解决PCR检测所带来的假阳性问题。

关 键 词:单核细胞增生李斯特菌  活菌检测  hlyA基因
文章编号:1004-8685(2006)06-0641-03
收稿时间:2006-01-10
修稿时间:2006年1月10日

Detection of viable Listeria monocytogenes with RT-PCR assay
Li Shan-zhi,Wu Qing-ping,Zhang Ju-mei,Guo Wei-peng.Detection of viable Listeria monocytogenes with RT-PCR assay[J].Chinses Journal of Health Laboratory Technology,2006,16(6):641-643.
Authors:Li Shan-zhi  Wu Qing-ping  Zhang Ju-mei  Guo Wei-peng
Abstract:Objective:To develop a method for rapid detection of viable Listeria monocytogenes.Methods:The hlyA gene of Listeria monocytogenes was detected by mRNA-based RT-PCR.The sensitivity and specificity of the RT-PCR method were compared to conventional methods.Results:Only special fragment of Listeria monocytogenes could be extended by the primers.There was no crossreaction with Listeria and other food-borne pathogenes.The sensitivity of detection was 4.5 cfu/ml(g).Conclusion:This method can be used to detect viable Listeria monocytogenes in the samples to solve palse positive problems.
Keywords:mRNA  RT-PCR
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