| 草酸青霉可重复利用筛选标记5'氟乳清酸的构建 |
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| 引用本文： | 苏丹,凌小翠,秦秀林,冯家勋.草酸青霉可重复利用筛选标记5'氟乳清酸的构建[J].基因组学与应用生物学,2021,40(2):713-719. |
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| 作者姓名： | 苏丹 凌小翠 秦秀林 冯家勋 |
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| 作者单位： | 广西大学生命科学与技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530004 |
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| 摘 要： | 草酸青霉是纤维素酶高产真菌,也是科学研究的重要真菌之一.借助基因工程技术手段对工业真菌进行分子改造,可以有效提高菌株在工业生产中的经济效益,对工业菌株进行基因改造需要大量的筛选标记,目前草酸青霉中可用的筛选标记较少,因此需要构建一个草酸青霉可重复利用筛选标记转化系统.本研究构建以乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶基因(pyrG)作为选择标记,以草酸青霉pyrG缺失菌株为宿主菌构建转化系统.首先,构建了含有草酸青霉pyrG表达框及其终止子TT1重复序列的可重复利用pyrG筛选标记.然后,以pyrG筛选标记作为选择标记,以草酸青霉pyrG缺失菌株Δku70ΔpyrG(pyrG∷kan)为受体菌株,敲除Δku70ΔpyrG(pyrG∷kan)菌株中的kan基因,获得菌株Δku70Δkan(kan∷R-pyrG).最后,利用筛选标记中的pyrG终止子重复序列发生自我剪切,利用氟乳清酸(5-FOA)的筛选,获得pyrG缺失,kan抗性基因缺失菌株Δku70ΔR-pyrG.本研究成功建立以pyrG为筛选标记,草酸青霉pyrG缺失菌株为受体菌的可重复利用筛选系统.
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| 关 键 词： | 草酸青霉 无筛选标记系统 pyrG 反向筛选 |
Marker Recycling Via 5-fluoroorotic Acid Counter-selection in Penicillium oxalicum |
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| Su Dan,Ling Xiaocui,Qin Xiulin,Feng Jiaxun.Marker Recycling Via 5-fluoroorotic Acid Counter-selection in Penicillium oxalicum[J].Genomics and Applied Biology,2021,40(2):713-719. |
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| Authors: | Su Dan Ling Xiaocui Qin Xiulin Feng Jiaxun |
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