| 深海放线菌生淀粉酶基因的克隆表达及酶学特性研究 |
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| 引用本文： | 李丽珍,杨键,田新朋,麦志茂,苏宏飞,龙丽娟,张偲.深海放线菌生淀粉酶基因的克隆表达及酶学特性研究[J].生物加工过程,2015(2):35-40. |
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| 作者姓名： | 李丽珍 杨键 田新朋 麦志茂 苏宏飞 龙丽娟 张偲 |
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| 作者单位： | 中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物资源与生态重点实验室,广东省海洋药物重点实验室;中国科学院大学 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA092104);国家自然科学基金重点项目(41230962);国家海洋公益专项(201305018);广东海洋经济创新发展区域示范项目(GD2012-D01-002);中国科学院重点部署项目(KSCX2-EW-B-13) |
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| 摘 要： | 从深海放线菌Streptomyces sp.SCSIO03032基因组中扩增到1条含淀粉结合域的水解糖苷13家族基因amy032,该基因编码氨基酸与已知蛋白一致性最高为67%。将amy032插入表达载体pET32a启动子下游,构建重组载体pET-amy。重组质粒导入大肠杆菌Rosseta(DE3)菌株中,SDS-PAGE分析结果显示目的基因成功实现异源表达。Ni-NTA对重组酶进行纯化,并对其酶学性质进行表征。结果表明:重组淀粉酶AMY032的最适作用温度为50℃,最适pH为8.0,以可溶性淀粉为底物时的比酶活为(276±57)U/mg,Km为0.02g/L,Vmax为70mg/(L·min)。Ca2+能提高该酶的催化活性,Ni2+、Cu2+、Zn2+和Mn2+对该酶有抑制作用。AMY032对生玉米淀粉和生大米淀粉具有水解活性,其比酶活分别为(49±12)U/mg和(39±11)U/mg;扫描电镜结果显示AMY032使生玉米淀粉的表面产生明显凹陷。
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| 关 键 词： | 深海放线菌 基因组挖掘 有机物降解 淀粉结合域 克隆表达 |
Cloning,expression and characterization of raw amylase gene fromdeep-sea actinomycete |
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| LI Lizhen;YANG Jian;TIAN Xinpeng;MAI Zhimao;SUN Hongfei;LONG Lijuan;ZHANG.Cloning,expression and characterization of raw amylase gene fromdeep-sea actinomycete[J].Chinese Journal of Bioprocess Engineering,2015(2):35-40. |
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| Authors: | LI Lizhen;YANG Jian;TIAN Xinpeng;MAI Zhimao;SUN Hongfei;LONG Lijuan;ZHANG |
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| Affiliation: | LI Lizhen;YANG Jian;TIAN Xinpeng;MAI Zhimao;SUN Hongfei;LONG Lijuan;ZHANG Si;Guangdong Key Laboratory of Marine Materia Medica,CAS Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology,South China Sea Institute of Oceanology,Chinese Academy of Sciences;Graduate University of Chinese Academy of Sciences; |
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