| 农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化 |
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| 引用本文： | 毕政鸿,李哲,王志秋,戴雪梅,方家林,黄华孙,林位夫,LARDET Ludovic,MONTORO Pascal.农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化[J].南方农业学报,2014,45(7):1137-1146. |
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| 作者姓名： | 毕政鸿 李哲 王志秋 戴雪梅 方家林 黄华孙 林位夫 LARDET Ludovic MONTORO Pascal |
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| 作者单位： | 海南大学农学院,海口,570228中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家重要热带作物工程技术研究中心,海南儋州,571737法国农业研究国际合作中心生物系统部,法国蒙彼利埃34398 |
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| 基金项目： | Chinese State International Scientific and Technological Cooperation Program"948" International Scientific and Technological Cooperation Project financially supported by Chinese Ministry of AgricultureCATAS Fundamental Research Fund |
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| 摘 要： | 目的]采用正交设计L25(56)优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考.方法]以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度(OD600)、乙酰丁香酮(AS)浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响.结果]6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为:预培养0d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5d,AS 200 μmol/L,共培养温度25℃.在此优化条件下可获得最高转化频率.经过4~6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系.经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptⅡ、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达.培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6%;最终获得4株转AtMYB118基因植株.结论]优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持.
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| 关 键 词： | 橡胶树 农杆菌介导的遗传转化 AtMYB118基因 反转录PCR 易碎胚性愈伤组织 转基因植株 |
Optimization of system for Agrobacterium tumefaciens-mediated A tMYB118 genetic transformation into friable embryogenic calli in Hevea brasiliensis |
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