| 摘 要： | 本文旨在建立优化的观察肠系膜动脉三级分支(sMA,直径100~300μm)血管张力和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)内Ca~(2+)信号的同步变化的实验方法。分别采用DMT 360CW激光共聚焦微血管张力测定系统和Nikon C2激光共聚焦显微镜,同时记录Ca~(2+)通道激动剂KCl、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)以及Ca~(2+)通道抑制剂钆离子(Gd3+)诱导的去内皮sMA血管张力和VSMCs内Ca~(2+)信号的变化,并对共聚焦显微镜不同物镜(10×、20×、40×)下记录到的Ca~(2+)信号荧光值变化量进行对比分析,探索最佳的实验条件。结果显示,KCl可引起sMA显著收缩,20×、40×物镜下VSMCs内Ca~(2+)信号会同步增强,相比40×物镜,20×物镜下Ca~(2+)信号变化量更大,荧光值更稳定,而10×物镜下VSMCs内Ca~(2+)信号变化不明显;不同浓度的ET-1能够引起sMA浓度依赖性收缩,同样20×物镜下VSMCs内Ca~(2+)信号也呈浓度依赖性同步增强;ET-1预收缩sMA后加入Gd3+显著降低ET-1诱导的血管收缩效应,相应地20×物镜下VSMCs内Ca~(2+)信号也显著降低。以上结果表明,Ca~(2+)通道激动剂或抑制剂引起血管收缩或舒张的同时,VSMCs内Ca~(2+)信号会发生相应的变化,提示本实验方法可同步记录两者的变化,而且共聚焦显微镜20×物镜为最佳的实验条件。与分别应用血管张力检测技术测定血管张力变化和动态细胞荧光成像技术测定VSMCs内Ca~(2+)信号变化的方法相比,同步检测张力和Ca~(2+)信号的变化更简单实用,有效避免了不必要的实验误差。
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