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| 稳定表达HLA-A*1101蛋白的K562细胞株的建立 | |
| 作者姓名： | Zha XF Zhou YB Yang LJ Chen SH Li B Yan XJ Li YQ |
| 作者单位： | 1. 暨南大学医学院血液病研究所,广东广州,510632 2. 暨南大学医学院生化教研室 3. 暨南大学医学院血液病研究所 4. 暨南大学医学院血液病研究所,广东广州510632;暨南大学医学院再生医学教育部重点实验室,广东广州510632 |
| 基金项目： | 广东省自然科学基金重点项目 |
| 摘 要： | 本研究目的是建立稳定表达HLA-A*1101分子的K562细胞株,为研究慢性髓系白血病(CML)HLA-I限制性抗原特异T细胞的细胞毒作用提供靶细胞.利用RT-PCR从CML患者外周血单个细胞中扩增HLA-A*1101基因全长序列;利用重组PCR将2A肽连接子(D-V-E-X-N-P-G-P)基因连接到HLA-A+ 1101的3’端,并将其定向克隆入带有增强型绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pEGFP-N3,构成HLA-A+ 1101-T2A-EGFP转录盒的重组表达载体;利用电穿孔技术将pEGFP-N3或重组质粒转染入K562细胞,利用荧光显微镜监测绿色荧光蛋白的表达,通过G418筛选出有效转染pEGFP-N3或HLA-A* 1101 -T2A-EGFP载体的K 562细胞株;利用RT-PCR和流式细胞术检测HLA-A* 1101基因和蛋白的表述情况.结果表明,成功构建了以2A肽基因为连接子的HLA-A* 1101-T2A-EGFP真核表达载体;重组质粒转染的K562细胞经G418筛选2个月后,获得2株表达绿色荧光蛋白的K562稳定细胞株HLA-A* 1101 +K562和pEGFP-N3+ K562.RT-PCR检测证明,HLA-A* 1101+ K562细胞表达HLA-A* 1101基因,而pEGFP-N3+ K562细胞则不表达HLA-A*1101;流式细胞术分析显示,HLA-A* 1101和GFP蛋白双阳性HLA-A*1101+K562细胞占88.5％,明显高于pEGFP-N3+ K562细胞(0.698％).结论:建立了一个简单有效地筛选HLA-A+ 1101+ K562细胞株的方法,并成功地建立了膜稳定表达HLA-A*1101蛋白的K562细胞株,为进一步研究CML的特异性细胞免疫提供工具细胞. |
| 关 键 词： | 慢性髓系白血病 K562细胞 HLA-A*1101 基因克隆 基因转导 |
Establishment of stable subline of K562 cells expressing human leucocyte antigen a1101 |
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| Zha XF,Zhou YB,Yang LJ,Chen SH,Li B,Yan XJ,Li YQ.Establishment of stable subline of K562 cells expressing human leucocyte antigen a1101[J].Journal of Experimental Hematology,2011,19(5):1112-1116. | |
| Authors: | Zha Xian-Feng Zhou Yu-Bing Yang Li-Jian Chen Shao-Hua Li Bo Yan Xiao-Juan Li Yang-Qiu |
| Affiliation: | ZHA Xian-Feng1,ZHOU Yu-Bing2,YANG Li-Jian1,CHEN Shao-Hua1,LI Bo1,YAN Xiao-Juan1,LI Yang-Qiu1,3 1Institute of Hematology,2Department of Biochemistry,3Key Laboratory for Regenerative Medicine,Education Ministry,Jinan University Medical College,Guangzhou 510632,Guangdong Province,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | CML K562 cell HLA-A* 1101 gene cloning gene transfection |
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