β-1,3-葡聚糖酶在枯草芽孢杆菌中的表达与性质

藤黄节杆菌（Athrobacter luteu）β-1，3-葡聚糖酶（βglⅠ）能够特异性的作用于β-葡聚糖中的β-1，3-糖苷键，在酵母裂解活性上具有突出优势，但是βglⅠ在生产上存在表达低、生产成本高的问题。作者利用无缝克隆技术构建表达载体，实现了βglⅠ在枯草芽孢杆菌中的分泌表达，并通过比较不同Tat类型和Sec类型信号肽、RBS、5′UTR等表达元件来提高βglⅠ的胞外产量。结果表明，信号肽SPLipA使得βglⅠ表达水平提高了0.4倍，在此信号肽基础上继续比较各RBS和5′UTR序列，其中cry3A 5′UTR使βglⅠ产量高出出发菌株1.2倍。此外，利用Ni2+亲和层析柱纯化βglⅠ并对其酶学性质进行研究，结果表明该酶的最适反应温度为50 ℃，最适反应pH为6.0，在0～45 ℃、pH 4.0～9.0的范围内稳定性较好，比活为973 U/mg。