| 利用免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因的方法研究 |
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| 作者姓名： | 白久旭 王涛 赵智凝 孟艳玲 郭张燕 杨安钢 |
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| 作者单位： | 第四军医大学免疫学教研室,陕西,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:利用免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因,建立一种经济、有效、快捷的miRNA靶基因鉴定方法.方法:直接提取细胞总RNA后加入生物素标记的miRNA分子共孵育,而后利用免疫磁珠分离与miRNA结合的mRNA,或将生物素标记的miRNA分子瞬时转染HeLa或HepG2细胞,48 h后裂解细胞并在离心后应用链霉亲和素磁珠分离与miRNA特异性结合的mRNA.将分离获得的mRNA反转录获得cDNA,并以其为模板,以特异性引物和Oligo(dT)进行PCR扩增,而后经过克隆测序,通过生物信息学方法比对测序结果,鉴定miRNA的靶基因.结果:利用已知的let-7靶基因证实了上述方法的有效性,并通过该方法鉴定出let-7的一个新的靶基因.结论:建立了免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因方法,为miRNA靶基因的研究提供新的实验学方法.
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| 关 键 词： | 靶基因 免疫磁珠 方法学 |
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