| 绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定 |
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| 引用本文： | 胡业辉,李益鹏,王紫英,陈勖,任真,丁澦.绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定[J].复旦学报(自然科学版),2019,58(2). |
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| 作者姓名： | 胡业辉 李益鹏 王紫英 陈勖 任真 丁澦 |
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| 作者单位： | 复旦大学 生命科学学院 生理学与生物物理学系,上海,200438;复旦大学 生命科学学院 生理学与生物物理学系,上海,200438;复旦大学 生命科学学院 生理学与生物物理学系,上海,200438;复旦大学 生命科学学院 生理学与生物物理学系,上海,200438;复旦大学 生命科学学院 生理学与生物物理学系,上海,200438;复旦大学 生命科学学院 生理学与生物物理学系,上海,200438 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;教育部基础学科拔尖学生培养试验计划 |
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| 摘 要： | 绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原核表达系统,然后通过Ni-NTA亲和层析和Mono Q阴离子交换层析纯化,每升菌液能够得到超过43mg、纯度超过95%的重组GBP1蛋白.我们通过MALDI-TOF/TOF质谱法测定纯化的GBP1的精确分子量,通过微量热泳动(MST)和等温滴定量热(ITC)实验检测GBP1与7种不同来源荧光蛋白的亲和力.结果显示GBP1特异性地与源自Aequorea victoria的荧光蛋白及其衍生荧光蛋白相互作用,与RFP和Zoanthus GFP等无相互作用.GBP1与EGFP和sfGFP的亲和力最高,与YPet和T-Sapphire的亲和力稍弱,与CyPet的亲和力最低.
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| 关 键 词： | 荧光蛋白 绿色荧光蛋白结合蛋白 纳米抗体 蛋白表达 蛋白纯化 微量热泳动 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
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