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Ki-67启动子的克隆及其转录活性
引用本文:孙方浩,郑骏年,徐为,刘晓昀,张宝福,宋文哲,刘俊杰,章龙珍,顾玉明,高超,李望,裴冬生. Ki-67启动子的克隆及其转录活性[J]. 中华实验外科杂志, 2009, 26(1). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2009.01.032
作者姓名:孙方浩  郑骏年  徐为  刘晓昀  张宝福  宋文哲  刘俊杰  章龙珍  顾玉明  高超  李望  裴冬生
作者单位:1. 徐州市第一人民医院泌尿外科,221002
2. 江苏徐州医学院肿瘤生物治疗实验室,221002
3. 徐州医学院附属医院肿瘤中心
摘    要:目的 克隆肿瘤特异Ki-67启动子,观察其在人肿瘤细胞中的转录活性.方法 提取肾癌Ketr-3细胞基因组总DNA作为模板,聚合酶链反应(PCR)获取1.6 kb的Ki-67启动子DNA片段.克隆到pGL3-Basic载体构建双荧光素酶检测质粒pGLB-Ki-67.将pGLB-Ki-67转染4种人肿瘤细胞及人脐静脉内皮Huvec细胞,使用双荧光素酶检测系统鉴定启动子活性及肿瘤特异性.结果 电泳与测序结果 显示克隆出的Ki-67启动子片段序列与Genbank中记录一致,pGLB-Ki-67质粒构建成功.其启动子活性在Hela、BIU-87、Ketr-3、A549 4种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter/enhancer活性的21.0%、31.1%、23.9%和7.2%;在Huvec细胞内仅为0.5%.结论 克隆出I(5-67基因启动子(-820~+771),并证明其具有良好转录活性.

关 键 词:Ki-67基因  肿瘤  启动子  基因治疗

Cloning of Ki-67 promoter and its specific activity in different human carcinoma cell lines
Abstract:
Keywords:Ki-67 gene  Tumor  Promoter  Gene therapy
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