香烟烟雾提取物对CD4^＋T细胞向Th17细胞和调节性T细胞分化的影响

目的观察香烟烟雾提取物（CSE）对CD4^＋T细胞向Th17细胞和调节性T细胞分化的影响，为探索香烟烟雾暴露导致气道慢性炎症的机制提供实验依据。方法采用免疫磁珠法分离纯化健康志愿者外周血CD4^＋T细胞，以1×10^6／ml细胞密度接种于96孔培养板，分为以下8个组①空白对照组；②T细胞刺激剂组：加入T细胞刺激剂抗人CD3／28抗体微磁珠；③T细胞刺激剂CSE干预组：CD3／28＋2%CSE；④细胞因子组：CD3／28＋细胞因子；⑤细胞因子CSE干预组：CD3／28＋细胞因子＋2％CSE；⑥芳香烃受体（AHR）激动剂6-甲酰基吲哚3，2-b]咔唑（FICZ）组CD3／28＋细胞因子＋FICZ；⑦AHR拮抗剂白藜芦醇组：CD3／28＋细胞因子＋2％CSE＋白藜芦醇；⑧溶剂对照组：CD3／28＋细胞因子＋DMSO。细胞因子为含TGF-β/IL-1β／IL-6／IL～23的混合细胞因子，以诱导Th17细胞和调节性T细胞分化。培养5d后，收集细胞，采用流式细胞术检测细胞表面分子CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋细胞（Treg细胞），以及胞内细胞因子IL-17＋的CD4^＋T细胞（Th17细胞），计算各种刺激培养条件下，诱导生成的Th17及Treg细胞占CD4^＋T细胞的百分比。结果①CSE对Th17细胞分化的影响：空白对照组Th17细胞比例为（0．69±0．12）％，加入T细胞刺激剂后为（1．32±0．12）％，在此基础上加入CSE的干预组IL-17＋细胞比例升高为（2．17±0．24）％，（t=3．21，P〈0．01）；细胞因子组IL-17＋细胞比例为（1．35±0．08）％，而在此基础上加入CSE的干预组Th17细胞升高为（2．58±0．39）%（t=3．13，P〈0．01）。②CSE对Treg细胞分化的影响：在空白对照组中，Treg细胞占CD4^＋T细胞中的比例为（0．21±0．19）％，在加入T细胞刺激剂后，Treg细胞比例升高（3．59±0．37）％，加入细胞因子后，Treg细胞比例明显增加（5．85±0．76）％；在继续加入CSE干预后，Treg细胞比例明显减少（3．07±0．33）％（t=3．74，P〈0．01）；同样，T细胞刺激剂CSE干预组也出现Treg细胞比例减少（2．19±0．19）％，（t=2．71，P〈0．05）。③AHR活化对Treg细胞和Th17细胞分化的影响：AHR激动剂FICZ组的Treg细胞比例明显低于细胞因子组（2．60±0．40）％，（5．85±0．76）％]（t=4．18，P〈0．01），但Th17细胞比例升高（2．86±0．43）％，（1．35±0．08）％]（t=3．65，P〈0．01）。AHR阻断剂白藜芦醇组中的Treg细胞比例和Th17细胞比例均低于细胞因子组，分别为（0．33±0．14）％，（5．85±0．76）％]，（t=7．71，P〈0．01）和（0．42±0．07）％，（1．35±0．08）％]，（t=8．87，P〈0．001），并且和空白对照组接近，在细胞培养第5天通过7-AAD-AnnexinV对该组细胞检测并未发现细胞异常凋亡或死亡情况，结合该组细胞培养过程中的镜下形态推测该实验组CD4^＋T细胞的分化增殖受到白藜芦醇抑制。结论CSE可促进CD4^＋T细胞向Th17细胞分化，并抑制Treg细胞分化，这一过程可能通过AHR诱导。