基于面积归一化法对饲料中黄霉素总残留量的研究

建立了一种结合不同色谱及质谱技术测定饲料中黄霉素总残留量的方法。通过高效液相色谱对黄霉素标准混合物进行有效分离，结合液相色谱—串联质谱对黄霉素A化合物进行定量，并利用高分辨四极杆飞行时间质谱确定结果的准确性和唯一性，最终基于面积归一化法得出精确结果。黄霉素标准品经Platisil 5μm ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈和20 mmol/L（pH 5.0）乙酸铵溶液为流动相进行等度分离。同时，饲料基质经0.1%（v/v）甲酸甲醇溶液提取，采用Oasis PRiME HLB通过式固相萃取对提取液进行净化。目标物经Atiantis○RT3色谱柱(100 mm×2.1 mm，3 μm)，以乙腈和5 mmol/L（pH 5.0）乙酸铵溶液为流动相进行梯度分离，在负离子（ESI-）多反应监测（MRM）模式下进行定量分析。试验考查了不同高效液相色谱条件对黄霉素5种活性成分分离效果的影响，同时研究了不同提取溶剂和净化方式对黄霉素A化合物回收率的作用并优化其质谱条件。所建立的方法确保黄霉素5种活性成分完全分离，利用面积归一化法可知黄霉素A所占黄霉素混合物的比例为86.2%，RSD为0.66%。同时，本方法确保黄霉素A在10.0 ng/mL—1000.0 ng/mL范围内线性关系良好，线性相关系数（R2）大于等于0.9986。不同饲料基质中黄霉素A的低、中、高加标回收率为69.69% — 88.60%，RSD为0.96% — 3.38%，回收率稳定、重现性良好。经折算，各类饲料基质中，黄霉素抗生素的总加标回收率为80.66% — 102.55%。统计结果表明，所建立的方法普适性广，准确性强，灵敏度高，适用于饲料中黄霉素总残留量的精确定量分析，解决了国内外对黄霉素检测不准确的技术壁垒，因此被中华人民共和国农业农村部确定为最新的行业标准。

Study on the determination of total flavomycin in feedstuff based on the area normalization method