| 甲硫氨酸氨肽酶高通量微型化检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 杨玉兰,姜文侠,刘琦,孙瑞雪. 甲硫氨酸氨肽酶高通量微型化检测方法的建立[J]. 食品与发酵工业, 2012, 38(12) |
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| 作者姓名： | 杨玉兰 姜文侠 刘琦 孙瑞雪 |
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| 作者单位： | 1. 天津市工业生物系统与过程工程重点实验室,中国科学院系统微生物工程重点实验室,中国科学院天津工业生物技术研究所,天津,300308 ;天津科技大学,天津,300457
2. 天津市工业生物系统与过程工程重点实验室,中国科学院系统微生物工程重点实验室,中国科学院天津工业生物技术研究所,天津,300308 |
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| 基金项目： | 国家"十二五"863计划课题"啤酒酵母与果酒废渣资源化利用关键技术"，天津市滨海新区科技小巨人成长计划项目"食品酶工程关键技术与应用开发平台建设" |
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| 摘 要： | 采用甲硫氨酸对硝基苯胺底物检测甲硫氨酸氨肽酶酶活,通过优化甲硫氨酸氨肽酶检测条件提高检测方法的准确性和灵敏性,并在此基础上建立了微型化的检测方法———酶标板法,适应微型化高通量发酵培养对高通量酶活检测的要求,以实现氨肽酶产生菌真正意义上的高通量筛选。优化后的甲硫氨酸氨肽酶酶活微型化检测条件为:氨-氯化铵缓冲液40 mmol/L、pH 8.0、甲硫氨酸对硝基苯胺浓度6 mmol/L、温度60℃、酶反应时间10 min,于380nm波长比色测定。
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| 关 键 词： | 氨肽酶 甲硫氨酸氨肽酶 高通量筛选 |
Establishment of a High Throughput Method for Detecting Methionine Aminopeptidase Activity |
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| Abstract: | The substrate methionine p-nitroaniline in this paper had been used to measure methionine aminopeptidase activity.The accuracy and sensitivity of the detection were improved and the enzyme panel method was established baseed on the optimization of determination conditions,to adapt to the detection for miniaturization fermentation and the high throughput screening for high aminopeptidase-producing strains.The optimal determination conditions were as follows: 40 mmol/L ammonium chloride/ammonia buffer,pH 8.0,6 mmol/L methionine p-nitroaniline,reaction temperature 60 ℃,reaction time 10 min,measured colormetrically at 380 nm. |
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| Keywords: | aminopeptidase methionine aminopeptidase high throughput screening |
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