| 猪STAT-1α基因的原核表达及其多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 李延生,刘诚,张珂,李晓宁,李晓泉,尹珊,谢琳娟,何晓霞,罗扬,钟桃珍,罗廷荣.猪STAT-1α基因的原核表达及其多克隆抗体制备[J].广西农业科学,2014(1):118-122. |
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| 作者姓名： | 李延生 刘诚 张珂 李晓宁 李晓泉 尹珊 谢琳娟 何晓霞 罗扬 钟桃珍 罗廷荣 |
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| 作者单位： | [1]广西大学动物科学技术学院,南宁530005 [2]亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室,南宁530005 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31060336）;广西自然科学基金项目（2012GXNSFDA053009） |
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| 摘 要： | 目的]通过制备STAT-1α多克隆抗体,为进一步研究STAT-1α蛋白的功能特性及探索STAT-1α与猪瘟病毒间的相互作用机制奠定基础.方法]利用RT-PCR从猪肾PK-15细胞中克隆出STAT-1α基因保守片段,与pET-32a（＋）构建原核表达重组质粒,转化原核宿主菌（Rosetta）,进行IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经纯化和复性浓缩后,免疫小鼠制备STAT-1α多克隆抗体.结果]STAT-1α基因能与原核表达载体pET-32a（＋）构建原核表达重组质粒pET-STAT-1o,转化大肠杆菌Rosetta后的最佳体外诱导条件是IPTG 0.5 mmol/L、诱导时间6h,其重组蛋白主要以包涵体的形式表达.STAT-1α多克隆抗体具有高效特异性,与真核细胞PK-15细胞作用后,在PK-15细胞内能检测到STAT-1α蛋白表达,可观察到大部分细胞胞浆内有绿色荧光,但胞核内几乎无荧光,即STAT-1α主要定位在正常PK-15细胞的细胞浆内表达.结论]制备获得的猪STAT-1 α多克隆抗体特异性好,既能与原核细胞大肠杆菌（Rosetta）表达的STAT-1α反应,又能与真核细胞PK-15的STAT-1α发生反应.
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| 关 键 词： | 猪 STAT-1α基因 原核表达 多克隆抗体 |
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