| REST/NRSF基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 李宏图,施萍,庞希宁.REST/NRSF基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定[J].中国临床康复,2011(32):6036-6040. |
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| 作者姓名： | 李宏图 施萍 庞希宁 |
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| 作者单位： | [1]中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市,110001;辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室,辽宁省沈阳市110031 [2]中国医科大学附属第一医院全科医学教研室,辽宁省沈阳市110001 [3]中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室,辽宁省沈阳市110001 |
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| 基金项目： | 辽宁省科学技术厅科学技术计划项目（2010225034）; 沈阳市科学技术计划（2009-090063 2011-F10-222-4-00）~~ |
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| 摘 要： | 背景：神经元限制性沉默因子（REST/NRSF）能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的：构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法：针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生L-shREST/NRSF慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。包装产生慢病毒颗粒,随后将其感染大鼠骨髓间充质干细胞,采用Real-timePCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效率。结果与结论：PCR和测序证实,构建出了REST/NRSFshRNA的慢病毒载体L-shREST/NRSF,并能稳定转染大鼠间充质干细胞,感染效率达100%。4组shRNA序列均有基因沉默效果,并以第3组shRN序列效果最为明显。结果表明,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。
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| 关 键 词： | 慢病毒载体 REST/NRSF shRNA 基因 骨髓间充质干细胞 |
Construction and identification of lentiviral vector encoding shRNA against REST/NRSF |
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| Li Hong-tu,Shi Ping,Pang Xi-ning.Construction and identification of lentiviral vector encoding shRNA against REST/NRSF[J].Chinese Journal of Clinical Rehabilitation,2011(32):6036-6040. |
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| Authors: | Li Hong-tu Shi Ping Pang Xi-ning |
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| Affiliation: | 1 Department of Stem Cells and Reproductive Medicine, Key Laboratory of Cell Biology, Ministry of Public Health, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China; 2 Key Laboratory of Reproduction Health of Liaoning Province, Liaoning Province Research Institute of Family Planning, Shenyang 110031, Liaoning Province, China; 3Department of General Practice, the First Affiliated Hospital, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China |
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| Abstract: | |
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