| 分子伴侣共表达对重组蔗糖异构酶异源可溶性表达的影响 |
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| 引用本文： | 孙佳明,庞焦,高向红,李明玉,王从纲,李宪臻. 分子伴侣共表达对重组蔗糖异构酶异源可溶性表达的影响[J]. 食品与生物技术学报, 2022, 41(10): 104-112 |
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| 作者姓名： | 孙佳明 庞焦 高向红 李明玉 王从纲 李宪臻 |
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| 作者单位： | 大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034 |
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| 基金项目： | 辽宁省自然科学基金项目（20180550668）； |
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| 摘 要： | 蔗糖异构酶(sucrose isomerase,SIase)在异麦芽酮糖的酶法制备中发挥着重要作用。为了提高重组蔗糖异构酶的可溶性表达，作者利用分子伴侣共表达策略将源自Klebsiella sp.LX3的基因SIase进行异源表达并研究了重组酶的酶学性质。利用酶切连接技术构建重组质粒pET-24b-SIase并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行表达，发现其主要表达为包涵体。分别将携带4种分子伴侣蛋白基因的质粒(pKJE7、pGro7、pG-Tf2、pTf16)与含有目的基因的重组质粒在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中共表达，筛选到最佳分子伴侣质粒pGro7且提高了重组SIase的可溶性表达水平，其酶活力为14.8 U/mL，比未进行共表达的工程菌发酵酶活力(3.5 U/mL)有明显提高，进一步利用金属离子螯合层析技术纯化到SIase纯酶，酶学性质研究显示其最适反应温度为40℃，最适反应pH为6.0。动力学常数Km为(179.10±20.65) mmol/L、kcat/Km为(5.44±0.72)...
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| 关 键 词： | 蔗糖异构酶 异源表达 分子伴侣 酶学性质 |
Effect of Molecular Chaperone Co-Expression on Heterologous Soluble Expression of Recombinant Sucrose Isomerase |
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| SUN Jiaming,PANG Jiao,GAO Xianghong,LI Mingyu,WANG Conggang,LI Xianzhen. Effect of Molecular Chaperone Co-Expression on Heterologous Soluble Expression of Recombinant Sucrose Isomerase[J]. Journal of Food Science and Biotechnology, 2022, 41(10): 104-112 |
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| Authors: | SUN Jiaming PANG Jiao GAO Xianghong LI Mingyu WANG Conggang LI Xianzhen |
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| Keywords: | sucrose isomerase heterologous expression molecular chaperone enzymatic properties |
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