甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因SotSPSB的克隆及原核表达

【目的】克隆甘蔗B家族s0心PsB基因并进行原核表达，为进一步研究甘蔗SPS酶学特性及SPS活性调控机制奠定基础。【方法】在进化分析的基础上，通过同源克隆获得甘蔗SofSPSB基因部分序列，再结合RACE技术获得全长cDNA序列。扩增SofSPSB基因ORF并连到原核表达载体pETBlue－2上导入大肠杆菌BL21（DE3）中表达。【结果】通过比对B家族中进化关系很近的玉米（Zeamays）ZmSPS1和水稻（Oryzasativa）OsSPS1基因序列，并在保守区设计一对引物扩增获得甘蔗B家族SPS基因（SolSPSB）2330bp序列。结合5’－RACE和3’－RACE技术获得3481 bp SofSPSB基因全长cDNA序列，该序列包含一个3225bp的开放阅读框（0I江）；起始密码子（ATG）位于转录起始位点后56bp处，终止密码子（TGA）后有一段201bp的非编码序列，并带有真核生物典型的polyA尾巴；编码1074个氨基酸，SofSPSB与Zm—SPS1、OsSPS1的核苷酸序列同源性分别为94．7％和81．3％，氨基酸序列同源性分别为96．0％和83．9％；其理论分子量Mw=118．96kDa，等电点pI=6．30。经原核表达后纯化获得带6xHis标签的融合蛋白。【结论】克隆获得甘蔗B家族Sol-SPSB基因全长cDNA序列，成功构建了SoPSPSB基因原核表达载体，使其在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。