| 等电聚焦分离与18O稳定同位素标记联用的磷酸化蛋白质组学定量方法研究 |
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| 引用本文： | 隋少卉,王京兰,贾伟,卢庄,刘金风,宋丽娜,蔡耘,钱小红.等电聚焦分离与18O稳定同位素标记联用的磷酸化蛋白质组学定量方法研究[J].分析化学,2008,36(8). |
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| 作者姓名： | 隋少卉 王京兰 贾伟 卢庄 刘金风 宋丽娜 蔡耘 钱小红 |
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| 作者单位： | 1. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,北京,102206;防化指挥工程学院重点实验室,北京,102205
2. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,北京,102206 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 磷酸化蛋白质组学定量分析,要对磷酸化修饰富集技术和定量技术进行研究。基于此,本研究采用18O稳定同位素标记技术对胰蛋白酶酶解肽段混合物进行标记,并对其标记时间和标记后胰蛋白酶的变性条件进行优化。结果表明:在pH=4～5的KH2PO4缓冲体系中,37℃,标记反应持续19～24h,除了C-端肽之外,几乎所有的肽段都可达到100%标记;采用TCEP可以有效地抑制16O-18O回标现象。建立了与18O标记技术兼容性良好的IPG-IEF技术对磷酸化肽段进行选择性富集,富集后共从HepG2细胞中鉴定到491个磷酸化位点、362个磷酸化肽段和356个磷酸化蛋白,表明IPG-IEF在大规模磷酸化肽段分离富集中是有效的;最后与高准确度高灵敏度高分辨率的LTQ-FTICR质谱仪联用,建立了基于18O-IPG-IEF-LTQ-FTICR的磷酸化蛋白质组定量技术。实验结果表明,该技术可以实现磷酸化肽段的有效定性和定量。本研究为磷酸化蛋白质组学定量研究提供了实用技术。
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| 关 键 词： | 18O标记技术 等电聚焦 傅里叶交换离子回旋质谱(LTQ-FTICR-MS) 磷酸化蛋白质组定性与定量 |
Quantitative Phosphoproteomics Methods Based on Isoelectric Focusing and 18O Labeling Method |
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| SUI Shao-Hui,WANG Jing-Lan,JIA Wei,LU Zhuang,LIU Jin-Feng,SONG Li-Na,CAI Yun,QIAN Xiao-Hong.Quantitative Phosphoproteomics Methods Based on Isoelectric Focusing and 18O Labeling Method[J].Chinese Journal of Analytical Chemistry,2008,36(8). |
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| Authors: | SUI Shao-Hui WANG Jing-Lan JIA Wei LU Zhuang LIU Jin-Feng SONG Li-Na CAI Yun QIAN Xiao-Hong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | 18O Labeling method isoelectric focusing linear ion trap Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry qualitative and quantitative phosphoproteomics |
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