CDK2、p21和p27在生长激素腺瘤中的表达及CDK2抑制剂的体外应用

目的分析细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期调节因子p21和p27在生长激素腺瘤中的表达水平,观察CDK2抑制剂环O6-己基甲基鸟嘌呤(O6)对GH3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法构建包含3例垂体和46例腺瘤标本的组织芯片,按Knosp分级将肿瘤分为侵袭组(n=15)和非侵袭组(n=31),免疫组织化学技术分析CDK2、p21和p27的蛋白水平,结合随访信息分析其与临床特性的关系。GH3细胞分为O6组(0. 4μmol/L和4μmol/L)和二甲基亚砜组(DMSO),细胞增殖实验MTS法检测细胞活力; Annexin V实验检测细胞凋亡; Brdu实验检测细胞周期,Western blotting实验检测CDK2、p21和p27变化。结果腺瘤标本中CDK2、p21和p27的H-score评分分别为(104. 8±28. 3)分、(195±39. 2)分、(158. 8±32. 3)分,CDK2在侵袭组表达较非侵袭组明显增高(140±31. 7)分vs.(87. 8±26. 7)分],p21(152. 3. 1±35. 2)分vs.(215. 7±41. 2)分]和p27(118. 1±28. 4)分vs.(173. 7±34. 3)分]则明显降低(P 0. 05)。O6处理GH3细胞后,细胞活力与DMSO组相比,不同剂量O6处理组细胞活力分别为DMSO组的(84. 5±7. 6)%和(76. 2±7. 1)%(24 h)、(75. 7±7. 3)%和(69. 6±6. 2)%(48 h)、(70. 2±6. 4)%和(61. 3±5. 5)%(72 h)。处理24 h后,O6组Annexin V阳性细胞分别为(8. 86±1. 78)%(P 0. 05)和(19. 36±4. 20)%(P 0. 01),而DMSO组为(3. 35±0. 73)%,PI阳性则分别为(3. 82±0. 53)%(P 0. 05)、(10. 14±2. 65)%(P 0. 01)和(1. 34±0. 33)%。Brdu实验显示,O6将GH3细胞阻滞在G1期,分别为(50. 4±4. 1)%和(59. 4±4. 7)%(P 0. 05),DMSO组为(45. 7±3. 7)%。同时,蛋白印迹实验显示,O6处理后p21和p27呈现升高趋势(P 0. 05)。结论 CDK2、p21和p27表达与生长激素腺瘤侵袭密切相关,其抑制剂O6-己基甲基鸟嘌呤诱导GH3细胞凋亡,抑制细胞增殖。