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| 丙型肝炎病毒NS5A反式激活基因1的原核表达及多克隆抗体制备 | |
| 引用本文： | 郑铁龙,成军,洪源,李晓光,张延峰.丙型肝炎病毒NS5A反式激活基因1的原核表达及多克隆抗体制备[J].解放军医学杂志,2008,33(1):59-61. |
| 作者姓名： | 郑铁龙 成军 洪源 李晓光 张延峰 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院研究生大队,北京,100850 2. 北京地坛医院传染病研究所 3. 军医进修学院研究生大队 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(C030114) |
| 摘 要： | 目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备多克隆抗体。方法从pGBKT7-NS5ATP1质粒上切取NS5ATP1基因,克隆入pET32a( )质粒,构建pET32a( )-NS5ATP1表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达。亲和镍柱层析纯化该融合蛋白后,免疫新西兰兔,获得多克隆抗体,ELISA法检测多抗效价。结果以pET32a( )-NS5ATP1表达载体分别转化DH5α、BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得分子量为56kD左右的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4.5h时重组蛋白的表达量最高。Western blot证实其具有良好的抗原性。用该蛋白成功免疫新西兰白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价>1∶512000。结论成功构建原核表达载体pET32a( )-NS5ATP1,表达纯化NS5ATP1融合蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体,为进一步的研究奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 肝炎病毒 丙型 NS5ATP1基因 原核表达 |
| 收稿时间： | 2007-09-14 |
| 修稿时间： | 2007-11-12 |
Prokaryotic expression of HCV NS5ATP1 gene and preparation of polyclonal antibody |
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| Zheng Tielong, Cheng Jun, Hong Yuan,et al..Prokaryotic expression of HCV NS5ATP1 gene and preparation of polyclonal antibody[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2008,33(1):59-61. | |
| Authors: | Zheng Tielong Cheng Jun Hong Yuan |
| Affiliation: | Zheng Tielong, Cheng Jun, Hong Yuan, et al. |
| Abstract: | |
| Keywords: | hepatitis C virus NS5ATP1 prokaryotic expression |
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