重组人干扰素β1a的纯化及其理化性质 |
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作者姓名: | 李柳萍 杨胥微 黄志斌 喇文军 王妍 |
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作者单位: | 1. 吉林大学化学学院,吉林长春,130000 2. 深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东深圳,518055 |
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基金项目: | 广东省教育部产学研结合项目(项目编号:2012B091100408)深圳科技创新委2012年国际合作项目(项目编号:ZYA201106100083A)深圳科信局深科(项目编号:JSA200903201200A) |
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摘 要: | 目的纯化重组人干扰素β1a(recombinant human interferonβ1a,rhIFNβ1a),并分析其理化性质。方法应用15 L生物反应器悬浮微载体培养表达rhIFNβ1a的重组CHO细胞,细胞培养收获液经超滤浓缩、蓝胶亲和层析、脱盐和CM离子交换层析纯化后,采用水泡性口炎病毒抑制法测定rhIFNβ1a的效价;Lowry法测定蛋白含量;等电聚焦电泳法测定其等电点;SDS-PAGE和高效液相色谱法测定其纯度;Western blot法分析其免疫活性;SDS-PAGE和质谱仪测定其相对分子质量;圆二色谱法分析其二级结构。结果共纯化了3批样品,纯化的rhIFNβ1a平均蛋白浓度为0.284 0 mg/ml,平均比活可达1.06×108IU/mg,纯度达95%以上,蛋白质平均回收率为58.36%,蛋白质相对分子质量为20 445.0,等电点约为6.6,免疫活性良好,二级结构与国家标准品基本一致。结论成功纯化了rhIFNβ1a,并检测了其理化性质,为建立大规模制备rhIFNβ1a的生产工艺和制造检定规程,实现产业化奠定了基础。
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关 键 词: | 中国仓鼠卵巢细胞 重组人干扰素β1a 纯化 生物活性 |
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