人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的克隆及其在人肺癌细胞中转录活性的研究 |
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引用本文: | 唐小军,王艳萍,周清华,朱文,车国卫,陈晓禾,朱大兴,孙芝琳.人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的克隆及其在人肺癌细胞中转录活性的研究[J].中国肺癌杂志,2004,7(6):475-479. |
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作者姓名: | 唐小军 王艳萍 周清华 朱文 车国卫 陈晓禾 朱大兴 孙芝琳 |
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作者单位: | 610041,成都,四川大学华西医院四川省肺癌分子重点实验室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金 (No .30 2 70 589)资助~~ |
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摘 要: | 目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子,并检测它在多种人肺癌细胞株和人胚肺成纤维细胞株中的转录活性,为肺癌靶向性基因治疗的研究奠定基础。方法以人胚肾293细胞基因组DNA为模板,应用PCR方法克隆hTERT 5’端上游旁侧序列长约1.1kh的启动子片段,经DNA测序无误后克隆人荧光素酶报告质粒pGL3-Basic的荧光素酶基因上游,构建pGL3-hTER Tp重组质粒,用脂质体法瞬时转染人肺癌细胞株A549、SPC-A-1、LTEPa-2、NCI—H446、YTMLC、GLC-82、A2,以及人胚肺成纤维细胞株MRC5,转染48h后检测hTERT启动子在各细胞株中的转录活性。结果琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1.1kb。DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致,其5’端和3’端分别位于hTERT基因转录起始位点上游1126bp和43bp,片段长度为1084bp。采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL3-hTERTp重组质粒,均显示构建成功。瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示,hTERT启动子在所检测的肺癌细胞株中均有高低不同的转录活性,而在MRC-5细胞株中无转录活性。结论该实验克隆的1084bp大小的hTERT启动子在多种肺癌细胞株中均有转录活性,在人胚肺成纤维细胞中无转录活性。hTERT启动子有可能作为调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗。
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关 键 词: | 肺肿瘤 端粒酶催化亚单位(hTERT) 启动子 转录活性 |
修稿时间: | 2004年10月20 |
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