P cDNA16-53融合表达载体的构建

目的：利用基因重组方法构建出含有抑癌基因 Ｐ１６， Ｐ５３的融合表达载体。方法：用限制性内切酶 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ、 Ｘｈｏ Ｉ双酶切 Ｐ１６ Ａ，用 Ｎｈｅ Ｉ、 Ｘｈｏ Ｉ双酶切 Ｐ Ｍ Ａ Ｍ ｎｅｏ５３。采用低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法回收 Ｐ１６、 Ｐ５３基因片段，片段长度分别为８００ ｂｐ、１ ８００ ｂｐ。分别经抽提、沉淀、漂洗，使基因片段进一步纯化。利用定向克隆技术将 Ｐ１６、 Ｐ５３基因片段顺向插入经 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ、 Ｘｈｏ Ｉ双酶切后的ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３，再次转化后经快速鉴定筛选出 ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ１６ ５３融合表达载体。结果： Ｐ１６、 Ｐ５３的融合表达载体大小８ ０００ ｂｐ、插入方向为正向。结论：用基因重组技术可以将两个抑癌基因构建在一个表达载体中进行表达，这为利用多基因治疗肿瘤的基础研究与临床研究提供了前提条件。

Construction of p16 and p53 gene fusion expresion vector