人神经干细胞异种移植示踪检测分析

目的摸索人胎脑神经干细胞（hNSC）在动物移植研究中理想的示踪检测方法，探讨hNSC移植后的命运，为新生儿缺氧缺血性脑损伤的干细胞治疗提供依据。方法用添加表皮生长因子＋碱性成纤维细胞生长因子＋白血病抑制因子的N2培养基从流产的人胚胎前脑组织培养出神经干细胞球，通过免疫荧光技术检测神经干细胞巢蛋白（Nestin）抗原标志和细胞分化潜能以鉴定其干细胞属性。取体外培养6d的神经干细胞集落，进行PKH26标记后培养和分化示踪。将培养14 d的神经球移植到缺氧缺血性脑病的新生鼠侧脑室，12只鼠分为PKH26标记示踪组（4只）、免疫反应检测组（4只）和对照组（4只），于移植后第4、7、14天杀鼠取脑，全脑切片，行抗人细胞核抗体（抗-hNuc）和抗人神经丝抗体（Anti-hNF）的特异性免疫反应检测及PKH26的荧光观察。结果体外培养获得典型人胎脑神经干细胞球。PKH26能高效标记神经干细胞，标记的阳性率〉95％，标记分子可伴随干细胞增殖、迁移和分化，但不进入细胞突起，仅位于胞体。Anti-hNuc免疫荧光检测和PKH26示踪结果显示：植入脑室的hNSC，4d即可迁移到嗅球、额叶皮层内侧中央前区、海马、枕叶皮层等部位的颗粒层内，小脑蒲氏细胞层有单层标记细胞排列，中脑区域也有广泛的标记细胞分布，损伤灶区有明显多的移植细胞分布。抗-hNF检测结果显示：在大脑皮层的颗粒层有阳性反应细胞，彼此间有连接发生。结论可用PKH26对体外培养获得的hNSC进行标记示踪。Anti-hNuc可用于检测移植细胞在受体鼠脑内的分布，抗-hNF可用于检测移植细胞的成神经元分化及神经元问发生的连接。hNSC经脑室途径移植缺氧缺血性损伤的新生大鼠脑，可快速迁移到全脑多处远距离部位，并构建神经元连接，损伤灶区对移植细胞有牵引作用。

Exploration of tracing and detecting xenografts derived from human neural stem cells