| 人α1微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 |
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| 引用本文： | 魏雁虹,耿辉,宋帅,孟莹,杨广民.人α1微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达[J].中国医药,2013(11):1597-1600. |
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| 作者姓名： | 魏雁虹 耿辉 宋帅 孟莹 杨广民 |
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| 作者单位： | 吉林省人民医院检验科,长春130021 |
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| 基金项目： | 吉林省科技发展计划项目（20130102085JC）;吉林省卫生厅科研课题（20122078） |
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| 摘 要： | 目的构建人α1微球蛋白（α1-MG）基因的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达、纯化，为制备仅。一MG诊断试剂中原料抗体、标准品及质控品奠定基础。方法从人胚胎肝脏中提取总RNA，利用反转录聚合酶链反应技术扩增α1-MG基因。然后克隆至PQE30表达载体，转化大肠杆菌M15中进行表达，并经镍固定金属亲和层析进行纯化，蛋白质印迹进行免疫学鉴定。结果获得了与Genebank报道一致的仪。一MG基因片段，成功构建了成熟人α1-MG的原核表达载体PQE30-α1-MG，质粒转化大肠杆菌并经1mmol／L异丙基硫代半乳糖诱导5h后，可表达相对分子质量约25000的外源蛋白，表达的α1-MG大部分在包涵体中，并可经镍固定金属亲和层析纯化，纯化有效率95％以上，BCA法测定纯化的α1-MG蛋白含量为25mg／L。蛋白质印迹表明，该蛋白可与抗人仅．一MG天然抗体反应。结论通过基因工程方法可获得高效表达的重组α1-MG蛋白，该蛋白具备同天然仅。一MG相同的生物学特性，为下一步进行α1-MG相关研究及应用奠定基础。
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| 关 键 词： | α1微球蛋白 重组蛋白 反转录聚合酶链式反应 蛋白质印迹 |
Cloning of human recombinant alpha l-microglobulin and expression in Escherichia coil |
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| WEI Yan-hong,GENG Hui,SONG Shuai,MENG Ying,YANG Guang-min.Cloning of human recombinant alpha l-microglobulin and expression in Escherichia coil[J].China Medicine,2013(11):1597-1600. |
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| Authors: | WEI Yan-hong GENG Hui SONG Shuai MENG Ying YANG Guang-min |
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| Affiliation: | . (Department of Clinical Laboratory, Jilin Province People＇s Hospital, Changchtm 130021, Chitin) |
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