封闭Notch信号影响神经干细胞分化的体外研究

目的探讨γ-分泌酶抑制剂N-［N-（3，5-二氟苯乙酰丙烯基）］-s-苯甘氨酸叔丁基酯（DAPT）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导神经干细胞（NSCs）分化的作用及对Notch通路的影响。 方法原代培养来自大鼠前脑组织的NSCs，根据处理措施将NSCs分为溶剂对照组、TGF-β1诱导组（TGF-β1处理细胞，浓度为5 ng/L）和DAPT干预组（5 ng/L TGF-β1基础上加入1或10 μmol/L DAPT）。细胞培养3、8、24和48 h后，real-time RT-PCR检测Notch信号关键分子Notch1和Jagged1 mRNA的表达；Western Blot检测星形胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及NSCs标志物-巢蛋白（Nestin）的表达；细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、GFAP及Nestin的表达。 结果TGF-β1处理后，可加速诱导NSCs的分化。NSCs标记物GFAP的表达呈现时间依赖性，早期并不表达，在8 h后GFAP开始表达，并随时间延长而表达增加。而Nestin早期明显表达，但8 h后表达明显下调，这提示（TGF-β1）作用8 h后可诱导NSCs向星形胶质细胞转化。深入研究显示，Notch1和Jagged1也在TGF-β1作用8 h后表达逐渐升高，这提示TGF-β1介导星形胶质细胞转化过程中，Notch信号可能被激活进而参与了此过程。应用DAPT处理后，GFAP表达在8 h与对照组相比无明显差异，而在48 h后逐渐下降；伴随着Notch1和Jagged1表达的下调，提示DAPT作用后，NSCs向星形胶质细胞转化被抑制，这与Notch信号活性的下降有关。 结论TGF-β1可诱导了NSCs向星形胶质细胞转化，并且具有时间依赖性；其机制可能与Notch信号的活化有关。DAPT的干预可封闭Notch信号，进而抑制TGF-β1介导NSCs向星形胶质细胞分化。