9V型肺炎球菌多糖蛋白结合物中游离多糖去除方法的筛选及优化

目的 筛选一种有效去除9V型肺炎球菌(Pn9V)多糖蛋白结合物中游离多糖的方法，并进行工艺优化及稳定性验证，以期用于多价肺炎结合疫苗的制备。方法 制备Pn9V-CRM₁₉₇结合物，分别采用分子筛(Sepharose 4FF)、离子交换层析(DEAE Sepharose FF)、疏水层析(GP-Butyl)及硫酸铵(ammonium sulfate,AS)盐析法去除结合物中的游离多糖，通过比较游离多糖百分比、多糖回收率及蛋白回收率筛选最适方法，并对确定的方法进行工艺优化。连续制备3批结合物，验证工艺的稳定性。结果 疏水层析和离子交换层析均可将Pn9V-CRM197结合物的游离多糖降至5%以下，疏水层析多糖及蛋白回收率(34.7%和50.1%)高于离子交换层析(16.2%和25.7%)，选择疏水层析去除结合物中的游离多糖。优化的工艺为1.1 mol/L AS上样，注射用水洗脱，层析载量为1.81 mg蛋白/mL填料。连续制备的3批结合物游离多糖去除率、多糖回收率及蛋白回收率良好，且批间一致性高；2～8℃放置6个月，结合物稳定性良好，(25±2)℃放置6个月，游离多糖百...