| 摘 要： | 目的:研究microRNA-155(miR-155)高糖诱导人血管内皮细胞(HUVECs)中的表达,并探讨miR-155是否通过调节PDCD4(Programmed cell death 4)的表达参与了高糖诱导的血管内皮细胞凋亡的过程。方法:用不同浓度D-葡萄糖(5.5、11、22及33mmol/L)孵育HUVECs 48h,采用荧光定量PCR技术(Quantitative RTPCR)检测细胞中miR-155、BAX(BCL-2associated X Protein)、BCL-2(B cell lymphoma/lewkmia)及CASPASE-3(Apoptosis-related cysteine peptidase)的mRNA表达情况;采用Western blot方法检测BAX、BCL-2及CASPASE-3蛋白在细胞中的表达变化。通过数据库及生物信息学软件预测miR-155的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因系统进行验证。进一步通过转染miR-155mimics和阴性对照miRNA至HUVECs后观察其对靶基因表达及细胞凋亡功能的影响;同时在HUVECs细胞中干扰靶基因的表达并观察其对细胞凋亡功能的影响。结果:随着葡萄糖浓度的增加,HUVECs中miR-155与BCL-2的mRNA表达水平呈浓度依赖性降低(P0.05),BCL-2的蛋白表达水平也呈浓度依赖性降低(P0.05);而BAX和CASPASE-3的mRNA及蛋白表达水平呈浓度依赖性升高(P0.05)。生物信息学分析发现miR-155的靶基因为PDCD4,经体外双荧光素酶报告基因系统检测,证实PDCD4是miR-155的靶基因。体外细胞实验发现miR-155能降低靶基因PDCD4的mRNA与蛋白的表达水平,并抑制HUVECs细胞的凋亡;PDCD4具有促进HUVECs细胞凋亡的功能。结论:高浓度葡萄糖可降低血管内皮细胞中miR-155的表达水平,并增加凋亡相关基因的表达水平。PDCD4是血管内皮细胞中miR-155的重要靶基因,miR-155通过调节PDCD4表达参与了高糖诱导的血管内皮细胞的凋亡过程。
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