克诺罗杆菌检测用单克隆抗体的制备及功效评价 |
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引用本文: | 袁辰刚,杨海荣,杨捷琳,吴杨,陈颖,潘良文,何宇平.克诺罗杆菌检测用单克隆抗体的制备及功效评价[J].食品工业科技,2014(10):209-214. |
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作者姓名: | 袁辰刚 杨海荣 杨捷琳 吴杨 陈颖 潘良文 何宇平 |
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作者单位: | 上海出入境检验检疫局;中国检验检疫科学研究院;上海友科生物科技有限公司 |
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基金项目: | 国家自然科学基金青年基金项目(31101246);上海市科委项目(11495810600,11dz0502700) |
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摘 要: | 目的:选择克诺罗杆菌标准菌株中的多株代表菌株作为抗原,采用多抗原组合免疫的方法,筛选制备抗克诺罗杆菌属(Cronobacter spp.)检测用单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并对获得的抗体进行各项指标评价,为进一步建立克诺罗杆菌免疫学快速检测方法创造条件。方法:采用冻融裂解、超声破碎、全颗粒三种方法制备抗原,以克诺罗杆菌标准菌株及分离菌株20株,9株非克诺罗杆菌进行筛选。筛选获得的抗体鉴定特异性,进行Ig亚类分型,测定效价及相对亲和力常数。结果:获得6株针对克诺罗杆菌的杂交瘤细胞株,腹水效价均在1∶107以上;相对亲和常数均大于1.0×1010L/mol。采用"鸡尾酒法"将多种抗体应用到胶体金试纸条制备上,可获得检测灵敏度为105CFU/mL,特异性较好的试纸条。结论:成功制备了针对克诺罗杆菌的多株单克隆抗体,抗体特异性检测表明,所制备的6株单克隆抗体针对克诺罗杆菌不同的亚种或亚型。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)和胶体金试纸条检测阪崎肠杆菌的方法。为进一步开发阪崎肠杆菌的免疫检测试纸条,建立快速的检测方法创造条件。
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关 键 词: | 克诺罗杆菌 单克隆抗体 快速检测 |
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