| A cell model for high-throughput screening GLP-1 receptor agonists北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 王芮,杨紫鑫,柯志强,成细瑶,苏正定.A cell model for high-throughput screening GLP-1 receptor agonists北大核心CSCD[J].中国药理学通报,2023(9):1793-1798. |
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| 作者姓名： | 王芮 杨紫鑫 柯志强 成细瑶 苏正定 |
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| 作者单位： | 1.湖北工业大学工业发酵省部共建协同创新中心430068;2.湖北科技学院咸宁医学院437100;3.广西大学轻工与食品工程学院530004; |
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| 基金项目： | 湖北省教育厅科学研究计划指导性项目(No B2021224)。 |
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| 摘 要： | 目的构建GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型。方法构建pEGFP-GLP-1R-3C重组质粒,转染HEK293T细胞,用G418和流式细胞仪进行筛选。所构建的细胞系命名为HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。Western blot和激光共聚焦检测GLP-1R-3C-eGFP蛋白的表达。将环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)响应元件报告基因转染HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞,不同浓度的GLP-1刺激后,用一步法荧光素酶报告基因检测试剂盒检测发光值反映细胞cAMP水平,采用cAMP试剂盒(ELISA)进行验证。结果成功构建HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。不同浓度GLP-1刺激后,发光值变化趋势与细胞cAMP水平变化趋势相似。本实验中Z′因子的值为0.52。结论本研究建立了基于重组HEK293T细胞株,其可用于GLP-1受体激动剂高通量筛选。
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| 关 键 词： | 2型糖尿病 GLP-1 GLP-1受体激动剂 小分子GLP-1受体激动剂 cAMP响应元件 荧光素酶报告基因 Z′因子 |
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