激活Hacat细胞表面Toll样受体促进创面愈合的机制

目的:细胞表面Toll样受体对激发先天性免疫、抵抗微生物感染有重要作用.最近研究发现激活细胞表面Toll样受体不仅可以预防微生物感染,还可以促进组织再生.实验通过脂多糖激活体外培养的角质细胞株Hacat细胞表面Toll样受体,观察其促进创面愈合的可能机制.方法:实验于2007-07在解放军第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科完成.①实验分组及方法:角质细胞株Hacat由解放军第四军医大学西京医院皮肤科馈赠;脂多糖为Sigma公司产品;小鼠抗人Toll样受体2单克隆抗体、兔抗人Toll样受体4多克隆抗体购于ebioscience公司.体外培养Hacat细胞,根据脂多糖(500 ng/L)与Hacat细胞共培养24,48,72 h将细胞随机分为脂多糖作用24 h 组、脂多糖作用48 h 组、脂多糖作用72 h 组,另设对照组,只加溶剂二甲基亚枫.②实验评估:蛋白免疫印迹技术检测脂多糖对Hacat细胞Toll样受体2、Toll样受体4及核因子-κB表达的影响;荧光定量聚合酶链反应检测脂多糖作用后Hacat细胞内基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9及血管内皮生长因子的表达.结果:光学显微镜下正常人皮肤表皮及角质细胞Toll样受体2、Toll样受体4表达呈蓝黑色;脂多糖作用于Hacat细胞24,48,72 h 后Toll样受体2、Toll样受体4、核因子-κB表达均高于对照组(P ＜ 0.01).与对照组相比,其他3组基质金属蛋白酶3及血管内皮生长因子表达均增高(P ＜ 0.01,P ＜ 0.05).脂多糖作用24 h 组基质金属蛋白酶9表达与对照组差异无显著性(P ＞ 0.05),脂多糖作用48,72 h 组与对照组比较,差异显著(P ＜ 0.05).结论:激活Hacat细胞表面Toll样受体有促进创面愈合作用,其机制可能与脂多糖作用于Toll样受体从而激活核因子-κB信号传导通路促进细胞释放基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9及血管内皮生长因子等因素有关.

Mechanism of active Toll-like receptors on the surface of Hacat cells to promote wound healing