肝细胞核因子4α对肝肿瘤细胞功能基因表达的影响

目的利用AdEasy系统构建共同表达人肝细胞核因子4α（HNF4α）和绿色荧光蛋白（GFP）的复制缺陷型重组腺病毒——AdHNF4α，体外感染人肝肿瘤细胞株，观察HNF4α表达上调对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。方法通过逆转录（RT）-PCR方法获取目的基因HNF4αcDNA片段，利用腺病毒载体AdEasy系统构建腺病毒质粒pAdHNF4α，经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHNF4α；将AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞株HepG2和Hep3B，通过RT—PCR、Western印迹法检测HNF4α在上述细胞中的表达；同时观察外源导人HNF4α对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒pAdHNF4α；经293细胞包装，4d后观察到GFP明显表达，反复扩增最终获得约1×10^10efu／ml滴度的重组腺病毒AdHNF4α；AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞72h后，有约90％以上的细胞表达GFP，HNF4αmRNA表达明显上调，蛋白表达分别增加3．4倍（HepG2）和5．2倍（Hep3B）；同时肝细胞相关功能基因包括载脂蛋白、细胞色素P450家族、谷氨酰胺合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶及葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表达均明显上调，且肿瘤细胞凋亡率也明显增加。结论利用重组腺病毒载体可将外源HNF4α基因导入肝肿瘤细胞并维持高效表达，同时正常肝细胞重要功能基因表达亦增强，肿瘤细胞生物学特性明显改善，这将为基因修饰移植肝细胞研究提供新思路。

Construction of recombinant adenoviruses carrying hepatocyte nuclear factor 4α and evaluation of its effect on hepatoma gene expression